产品中心
PRODUCT CENTER
可分离式链酶亲和素磁珠
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MMI 107 |
BcMag™ 可分离式链酶亲和素磁珠 |
2ml |
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MMI 108 |
BcMag™ 可分离式链酶亲和素磁珠 |
5ml |
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MMI 109 |
BcMag™ 可分离式链酶亲和素磁珠 |
10ml |
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如需大量订购，请联系我们报价！ |
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产品属性 |
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磁珠大小 |
直径~ 2.5 µm |
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磁珠密度 |
~10 x 107 beads/mg ( 2.5µm) |
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磁力大小 |
~40-45 EMU/g |
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磁化类型 |
超顺磁性 |
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浓度 |
10 mg/ml (10mM Tris, 0.15 M NaCl,0.1% BSA,1 mM EDTA, pH7.4, 0.01% NaN3) |
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结合能力 |
生物素化BSA / 每毫升磁珠 |
>1mg/ml |
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生物素化单链核苷酸 |
~ 2,000 pmoles /ml |
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储存 |
室温运输，4℃储存. 不可冷冻 |
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BcMag™ Cleavable Streptavidin Magnetic Beads是表面覆盖有高纯度（>97%）链酶亲和素的二氧化硅基质的超顺磁性磁珠。由于链酶亲和素通过内置的可切割二硫键连接物（图1）与磁珠连接，因此，可用还原剂（如DTT或β-巯基乙醇）从磁珠上切割并分离出链酶亲和素-生物素化分子的复合物，而不需要像亲和纯化一样，在纯化后使用苛刻的洗脱试剂（如8M胍或SDS洗涤剂）洗脱目标产物（图1）。这款磁珠经过专门设计和测试，可用于免疫沉淀、细胞分选以及从细胞裂解物或杂交反应中快速捕获目标分子，如DNA、RNA、抗体或蛋白质等。
链霉亲和素和生物素之间表现出的相互作用，是已知的最高非共价相互作用之一。抗生物素、链霉亲和素、单体抗生物素及其类似物已成为探针和亲和配体的有力工具，广泛应用于生化分析、疾病诊断、亲和纯化和药物递送。链霉亲和素是一种四聚体生物素结合蛋白，来源于亲和素链霉菌，分子质量为60000道尔顿。链霉亲和素不含碳水化合物结构，pI值较低，非特异性结合程度较低，使链霉亲和素成为许多检测系统的理想选择试剂。
特点及优势
链霉亲和素-生物素结合系统的优势和益处
l 极高的亲和力：链霉亲和素是同源四聚体，具有较高的生物素结合亲和力，具有KD∼
10−14米。
l 高稳定性：生物素结合复合物具有良好的稳定性，可抵抗极端pH值、温度（2°C和
40°C）、极端的有机溶剂环境、变性剂（如氯化胍）、洗涤剂（如SDS）和
蛋白水解酶。
l 突出的选择性和特异性：生物素和链霉亲和素的相互作用具有高度的特异性，可极大降
低非特异性结合概率。
l 高灵敏度：高稳定性和特异性确保了极高的检测灵敏度。
l 灵活性：生物素体积小的特点和显著的稳定性被证明非常适用于结合各种分子，例如
合成聚合物、荧光团、与小分子或生物分子中的特定位置结合，从而对共轭生物分子的结构和功能施加最小的干扰。
使用链霉亲和素磁珠的优点和益处
l 容易从磁珠上洗脱出生物素化分子--链霉亲和素的复合物
l 快速、简单、一步式的高通量操作过程：不需要离心柱或过滤器，或费时费力的重复移液或离心
l 极高的结合能力
l 非常低的非特异性结合率
l 可根据需要调整反应体积的大小，适用于自动化操作
操作协议
所需耗材
l Binding Buffer: 1x PBS, 0.1% BSA, pH 7.4
l 磁力分离器（适用于手动操作）：根据实验时生物样品的体积，使用者可以选择一下不同型号的磁力分离器：
BcMag™ separator-2可以容纳两个单独的1.5 ml离心管(Cat.# MS-01);
BcMag™ separator-6可以容纳六个单独的1.5 ml离心管(Cat.# MS-02);
BcMag™ separator-24可以容纳24个单独的1.5-2.0 ml离心管(Cat.# MS-03);
BcMag™ separator-50可以容纳一个单独的50 ml离心管，一个15ml的离心管，以及四个1.5ml离心管(Cat.# MS-04);
BcMag™ separator-96 可以配合96 ELISA板和PCR板使用 (Cat.#MS-05).
操作过程
提示
l 一下操作过程是一个通用的亲和纯化操作。为了获得最佳结果，每个用户都应该根据所需要纯化的目标蛋白确定最佳工作条件。
l 我们强烈建议用户使用滴定法，根据粗样品中目标生物素化分子的浓度（基于磁珠结合能力），优化每次使用中添加的磁珠数量。使用过多的磁珠会导致过高的背景，而使用磁珠的量过少会导致产量降低。
1. 将最佳添加量的磁珠转移到离心管中。将离心管放在磁力分离器上1-3分钟，当磁珠完全沉淀时，去除上清液。
2. 取下试管，用5倍体积的PBS buffer通过涡漩清洗磁珠30秒。将试管置于室温下1-3分钟。将试管放在磁力分离器上1-3分钟，当磁珠完全沉淀时，去除上清液。
3. 重复步骤2两次。
4. 向含有目标分子的粗样品中加入洗涤过的磁珠，并在室温或所需温度下培养1-2小时（温度越低，培养时间越长）。
提示：强烈建议进行滴定实验以优化培养时间。因为较长时间的孵化可能会导致背景过
高。
5. 用5倍磁珠体积的PBS buffer或1M NaCl彻底清洗珠（可多次清洗），直到洗脱液在280 nm
处吸光度接近背景水平（OD 280<0.05）。
提示：添加更高浓度的盐、非离子洗涤剂和还原剂可能会降低非特异性背景。例如，向
洗涤缓冲液中添加NaCl（浓度为1-1.5 M）、0.1-0.5%的非离子洗涤剂，如Triton X-
100或吐温20。
6.二硫键的切割
提示：由于配体之间的构象不同，用户应确定最佳工作条件，如还原剂、pH值和温度，以切割单个配体的二硫键。以下是从磁珠上切割共轭的GFP蛋白的示例。
1）在140 mMβ-巯基乙醇或5 mM DTT（二硫苏糖醇）中孵育磁珠（30mg/ml）。
a. 在 100 mM Tris-HCl, pH 8.0, 50 mM EDTA, 140 mM β-巯基乙醇条件下，室温2小时或
者过夜孵育，或者在98℃条件下5分钟。
b. 在100 mM Tris-HCl, pH 8.0, 50 mM EDTA, 5mM DTT条件下，室温2小时或者过夜孵
育，或者在98℃条件下5分钟。
