产品中心
PRODUCT CENTER
用于超灵敏荧光分析的醛基铕荧光磁珠
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Cat. No. |
Product Name |
Unit Size |
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GA101 |
2.5 µm BcMag™ Aldehyde-Activated Europium Fluorescence Magnetic Beads |
15 mg |
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GA102 |
2.5 µm BcMag™ Aldehyde-Activated Europium Fluorescence Magnetic Beads |
30 mg |
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GA103 |
5 µm BcMag™ Aldehyde-Activated Europium Fluorescence Magnetic Beads |
15 mg |
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GA104 |
5 µm BcMag™ Aldehyde-Activated Europium Fluorescence Magnetic Beads |
30 mg |
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Fluorescence dye properties
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Fluorophore |
Fluorescence color |
Excitation (nm) |
Emission (nm) |
Fluorescence lifetime (Ԏ) (µsec) |
Stokes shifts (nm) |
Selection of Emission Filter |
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Europium ion (Eu3+) |
Red |
340 |
615 |
730 |
275 |
620/40 |
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产品属性 |
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磁珠大小 |
2.5µm 直径; 或5µm直径 |
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磁珠数量 |
~1.47 x 108 beads/mg (2.5µm) ~ 5 x 107 beads /mg (5µm) |
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稳定性 |
短期保存 (<1 hour): pH 3-11; 长期保存: pH 4-10 温度: 4°C -140°C; 大多数有机溶剂 |
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磁力大小 |
~40-45 EMU/g |
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磁力类型 |
超顺磁性 |
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浓度 |
30 mg/ml (1 mM ETDA, pH 7.0) |
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功能团密度 |
2.5µm 磁珠 |
~240 µmole / g |
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5µm 磁珠 |
~200 µmole / g |
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储存 |
储存在 -20°C. |
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BcMag™醛基铕荧光磁珠（图1）是具有高密度醛基官能团的时间分辨荧光（TRF）磁珠。磁珠表面的醛基可以与蛋白质的N-末端或赖氨酸残基上的伯胺基自发反应，形成中间的席夫碱络合物。还原胺产生的固定化反应始于醛基和胺基之间产生初始产物聚希夫碱复合物，然后通过添加氰基硼氢化钠（NaCNBH3）将其还原为仲胺，这样在磁珠和配体之间就可以产生稳定的胺键。在含有20-30%DMSO或DMF的水性或有机溶剂中，生理碱性环境（pH 7.2至9）下，偶联反应仅需一步2至6小时的反应过程。与抗体和正常蛋白质的偶联效率通常大于85%，而且每毫克磁珠可以结合15至20µg蛋白。
这种磁珠通过结合活性醛基官能团、时间分辨荧光染料和磁性特性，提供了一种高灵敏度的检测方法。它们由纳米级超顺磁性氧化铁和铕金属核心组成，完全被高纯度二氧化硅外壳包裹，确保铁氧化物和铕金属不会出现浸出问题。这种亲水磁珠具有极低的非特异性吸附率，在各种缓冲液中具有良好的分散性和易于处理的特点。
尽管传统的荧光显色技术在过去几十年中得到了广泛应用，但它们在适用性和效率方面仍存在一些局限性：1.激发带较窄，背景信号强。2.斯托克斯位移较小，容易造成自熄现象。3.荧光对环境因素敏感，如金属离子浓度、pH值、温度和溶剂极性。4.荧光强度不足，不能检测单个生物分子。5.荧光间歇性（闪烁）影响分子检测的某些数据处理过程，造成误差。6.由于疏水性，容易聚集。
BcMag™ TR-FRET（时间分辨荧光共振能量转移）测定方法
BcMag™ TR-FRET测定方法与传统的FRET（Förster共振能量转移）测定方法不同，它利用时间分辨荧光磁珠（BcMag™ TR-Magnetic Beads）作为荧光供体团。供体和受体可以是两个蛋白质、两个DNA链、抗原、抗体或配体或其它受体。在一定的时间延迟后（通常为50至100秒），当供体和受体分子靠近并以时间分辨方式进行监测时，通过荧光共振能量转移产生信号。在BcMag™ TR-FRET测定方法中，微量的分析物可以通过时间分辨磁珠轻松地从样品中富集，从而提高灵敏度。该测定方法消除了由样品和塑料微孔板引起的所有荧光背景影响，以及直接激发受体所产生的背景影响。因此，BcMag™ TR-FRET测定方法的信噪比非常高，背景值非常低。此外，该测定方法不需要清洗步骤。BcMag™ TR-FRET测定方法在高通量筛选的生物分析中具有显著的优势，如测定灵活性、可靠性、提高测定灵敏度、更高的通量和更少的假阳性/假阴性结果。
由于其独特的特性，铕荧光团是一种高效的时间分辨荧光标记。它在340nm处激发，发出615nm的红色荧光，具有长荧光寿命（730微秒）和较大的斯托克斯位移（275nm）。利用这些特性，时间分辨荧光检测可以显著降低样品的荧光背景，并提高信噪比，使其比传统荧光染料具有更高一个数量级的检测能力。BcMag™ 醛基铕荧光磁珠是TR-FRET测定中优秀的供体材料。
TR-FRET磁性珠测定方法的工作流程（图2）
1.将与抗体结合的供体磁珠与细胞裂解液混合，并在连续旋转下孵育足够的时间。在混合过程中，磁珠保持悬浮在样品溶液中，使目标分析物能够与供体磁珠结合。2. 孵育后，使用磁力架将磁珠从样品中收集和分离。3. 添加与目标分析物结合的受体，并在连续旋转下孵育足够的时间。4. 多种微孔板读数仪进行TR-FRET测定。
优势和特点：
1. 本款磁珠具有在一种磁珠上，可以同时表现出双重功能的特点：分离/预浓缩和检测分析物，能够在同一磁珠上快速、简便、稳定和高通量地从复杂生物样品中分析痕量分析物。
2. 超高的灵敏度。检测限值低至10 pg/mL，而典型荧光测定的检测限值为100 pg/mL。
3. 极高的光稳定性和耐光漂白性。所有的镧系螯合物或香豆素分子以及氧化铁完全封闭在磁珠的内部，而不仅仅是在磁珠表面上。这种保护环境可以防止氧化铁和染料溶解到水介质中，使磁珠对溶剂、温度、pH等外部条件的敏感性降低。
4. 高荧光强度。由于单个磁珠含有高浓度的镧系螯合物，并且镧系螯合物本身具有40%到90%的高量子产率，因此磁珠具有超强的荧光强度，可显著提高分析灵敏度，而无需信号放大。这种高亮度的磁珠也是时间分辨FRET分析的完美供体。
5. 镧系螯合物或香豆素具有较大的斯托克斯位移（>250nm）、较窄的发射带（-10nm带宽）和较长的荧光寿命（μs），这大大降低了背景影响并提高了信号和干扰信号的比例。
6. 大多数生物检测过程的ELISA测定可以转化为HTRF测定。
7. 测定过程中无需清洗步骤。
8. 磁珠具有亲水性二氧化硅表面，通过具有不同长度连接剂的不同功能基团进行接合，可高效地结合多种配体，如多肽、蛋白质、抗体、小分子、碳水化合物、寡核苷酸、DNA/RNA等。
9. 由于磁珠的磁性特性，荧光磁珠非常适合于高通量自动化。
